Este es el primer paso regulador de la vía. La HK I, II y III se inhiben alostericamente, lo que quiere decir que a mayor concentración de glucosa mayor es su actividad, aumentando la velocidad de la glucolisis, pero se inhibe cuando la contracción de glucosa baja y la glucosa-6-fosfato aumenta pero la HK IV se inhibe con aumento de concentración la fructosa-6-fosfato.